主张用无血清培养基，收取上清后加PMSF等抑制剂，超滤浓缩，冻干后跑胶。

  看了一下他人做Western，发现有的人是直接裂解了细胞，收成的蛋白跑胶，有的是提出来的蛋白经过真空枯燥后成蛋白干粉，然后再用裂解液和蛋白酶抑制剂从头溶解。

  我的需求做的蛋白是VEGF165，其有60%能够排泄到细胞培养液中。在文献中看到我们写的是取上清液中的VEGF蛋白做Western，可是不知道详细怎样来进行上样之前的处理。

  我做了一次，办法是直接汲取细胞培养液200ul,取10ul和buffer混合后蛋白变性5-10min，然后上样，成果：未见意图条带，并且跑别离胶时在BUffer指示剂前端还有一条紫红色的条带，可能是培养液中的酚红指示剂吧。

  阴性成果考虑：1，VEGF蛋白浓度低。2，未加蛋白酶抑制剂，可能使蛋白降解。